卫生部门检测，含有三聚氢胺的奶制品
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1 2 3 ] 2008-09-17
这是悠游网的泳友们对此事件的评论。
卫生部门检测，含有三聚氢胺的奶制品[ 1 2 3 ] | star 2008-09-17 |
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三鹿吧 ----------众多评论
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简直就是谋杀。
太气愤了！严惩那些罪犯！
化学方法测蛋白质含量-------凯氏定氮法
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4
反应式为：
2NH2—+H2S04+2H+＝(CuSO4)＝(NH4)2S04
2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中
反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O
3. 用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量
反应式为：
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3
蛋白质含量测定方法：
1.凯氏氮测量法：时间长，成本高，精度低，经典方法，但对假、毒奶粉无测量意义。
2.仪器测量法：速度快，成本低，精度高，改进方法，但多数要求蛋白质要纯。
补充：
1物理化学法
物理化学法是根据化学变化或与化学变化有关的物理变化前后某一物理量的变化测定待测物的方法.
1.1比色法
1.1.1双缩脉法:目前已有许多文章报道了双缩脉反应测定尿蛋白〔‘〕.双缩脉法优点是对白、红蛋白产生颜色反应相近，干扰物质少，不受温度影响.但灵敏度低，且操作复杂，很难用于自动化仪器分析.
1.1.2 Lowery法:结合双缩脉法中铜盐反应与Folin一Ciocalteau试剂反应的特点，通过芳香族氨基酸残基Tyr和Try的迅速反应与肤链、极性侧链或两者的铜络合物较慢的反应而把磷钥酸发色基团还原成暗蓝色，在波长750 nm处测定人监(zl.本法比吸光光度法(a=280 nm)的灵敏度大10 =20倍.比双缩脉法大100倍.但该法基于酸试剂与蛋白的反应是非特效反应，抗干扰的能力差.
1.1.3丹宁酸法:丹宁酸用来沉淀蛋白质，但沉淀结构散，可用Caiilne取代蛋白质，蛋白质游离出来后用免疫法或空氮法测定.但此法操作麻烦，加三氯化铁与丹宁酸蛋白质反应显色，5 min后于510 nm处比色，0.1 mol的丹宁酸可结合0.333 }cg白蛋白，灵敏度达5 mol/L，线性范围为0.05一1.8岁L.
1.2浊度法
利用沉淀与蛋白质反应产生的浊度与标准溶液浊度比较而定量测得蛋白质浓度的方法.磺基水杨酸和三氯化铁是常用的蛋白质沉淀剂，磺基水杨酸法灵敏度与精密度都较高，但干扰物质多，这两种浓度法都受温度的影响.但由于操作简单、快速、试剂易购，因此，虽然它们的准确度和精密度相对较差，目前仍为临床常规检查所用.
1.3染料结合法
这是一种用蛋白质与染料反应显色而测定蛋白质的方法.对测定痕量蛋白质，此方法很合适.
1.3.1紫外一可见吸光光度法:过去曾有用胶金[[31澳酚蓝[[41测定蛋白质的文章报道.近年来的报道多用丽春红或考马斯亮蓝( CBB) G - 250.考马斯亮蓝G - 250在酸性溶液中显红绿色，与蛋白质结合后变蓝色，AI仙x从465 nm移至595 nm.线性范围。^-100 mg/L.该法是1996年由Bradlford提出的〔5].另外，湖北大学宋功武[[6]等利用荧光素与牛血清蛋白(BSA)相互作用形成复合物，最大吸收峰波长为480 nm，比试剂本身红移9 nm，提出了分析方法，其线性范围Ow 100 mg/L，灵敏度为0.48 pg/cm2.北京大学李克安[n]等在pH3.1时，在硝基磺酚S中加入BSA，发现最大吸收波长由580 nm红移至685 nm，且硝基磺酚S的吸收峰随BSA的加入而下降，从而建立了测定蛋白质的一种方法.他们还测定牛血清白蛋白(BSA)、人血清蛋白(HSA),y-球蛋白(y-G) ,卵白蛋白(OVA)、血红蛋白(Hb)以及溶菌酶( Lys)的工作曲线.北京大学李娜等[fsl在pFi2 . 0条件下用偶氮肿( I})作显色剂测定了牛血清白蛋白，标准工作曲线线性范围为。^- 60 mg/ L，灵敏度为0.巧ug/cm2.她们还研究了酸度、离子强度等对偶氮肿( I})一BSA分子复合物形成的影响
1.3.2荧光法:这是近年来兴起的一种新的测定蛋白质的方法，现已报道的有白蛋白蓝670法等[9]‘其灵敏度一般较低.有报道利用5,10,15,20一四(( 4-磺苯基)叶盼(TPPS)的性质测定蛋白质的线性范围为0.1--9.0 mg/mL，检出限为0.05 mg/mL.
另外还有兰州大学覃文武等〔‘”〕发现在pH3.84--4. 51的HAc一NaAc缓冲溶液中加入BSA后，茜素红在470 nm处的激发峰荧光强度熄灭明显，且熄灭程度Fol F与加入的BSA浓度呈线性关系，从而建立了一种荧光摔灭法测定蛋白质的方法.其线性方程Fo/ F二0.9+0.12C (mg/L)‘西北大学魏永锋等【111发现在TritonX-100的磷酸缓冲溶液中辣根过氧化物酶( HRP )催化过氧化氢氧化邻苯二胺的产物2, 3一二氨基吩嚓的荧光强度有明显增强，在一定的实验条件下，该产物的荧光强度与HRP的含量成正比.从而建立了一种催化荧光光度法测定自RP的一种方法.线性范围10 -- 200 Pg.检出限为8 Pg.应用此测定体系并结合酶联免疫吸附(ELISA)方法，又测定了人血清中的甲胎蛋白.厦门大学李东辉等【lzl根据在pH3.0时四磺基铝酞著(A1S4Pc)浓度在5 X IO-}-2 x 10-6 mol/L范围内，BSA对AlS4Pc的荧光碎灭有显著作用，建立了以A1S4Pc为探针的荧光碎灭法测定白蛋白的新方法，线性范围0.10--4.50 mg/L.检出限为40 }cg/L.
1.4金属离子一染料结合法
借用金属离子一染料和蛋白质在适宜条件下反应进而检测蛋白的方法，发展很快.钦-4, 5一二澳基荧光酮(DBPF)一Tween-80与蛋白质的显色反应用来测得尿蛋白.在pH2.9，血清蛋白能与钦-DBPF-Tween-80形成蓝色络合物，a ,} = 605
nm，加入少量乙醇能提高方法的灵敏度及稳定性，血清蛋白含量在。--6 mg/ml范围内服从比耳定律〔13].用邻苯二酚紫一钥与蛋白质在弱酸性介质中形成络合物，在波长h ,a,} = 680 nm处可测定约30 pg/mL的白蛋白.其灵敏度和重现性优于考马斯亮蓝法及联苯三酚红一钥(VI)法，也有科学家提出了蛋白质的咪哇一锌盐体系〔14]
1.5电化学方法
根据被测蛋白质的浓度与其发生电化学反应时引起的某些物理量的变化成线性关系对蛋白质测定的方法.
1971年Kuwana}lsl首次在染料修饰的石墨电极上得到血红蛋白的电催化反应，为研究蛋白质大分子在电极表面的电子
传递反应作了开创性工作，也提供了有效的研究途径.目前已有大量对蛋白质进行电化学研究的报道.
郑州大学林琳等〔16〕对血红蛋白(Hb)在四甲基氯化按促进下于裸银电极上的直接电化学行为进行研究，在pH5 . 0的0.3mol/L HAc-NaAc缓冲溶液中于+0.4V一一o.lv范围内循环扫描，血红蛋白产生一对氧化一还原峰，当有四甲基氛化钱存在时，峰电位之差为0.14V(扫描速率为10 my/s).动力学研究表明:该反应为单电子转移，转移系数a为0.60，电极反应速率常数K，为0.103 S-I.重要的是，氧化峰电流与血红蛋白浓度在2 X 10-} -1.5 x 10-5 mol/L范围内有良好的线性关系.青岛化
工学院焦奎等[ml发现了一种将邻氨基酚(OAP)一过氧化氢一辣根过氧化物酶( HRP)伏安酶联免疫分析法测定人血清甲胎蛋白的方法.该方法是将HRP催化过氧化氢氧化邻氨基酚的酶催化反应与邻氨基酚的氧化产物在滴汞电极上的还原反应相偶合，在B-R缓冲溶液中，在一0.43 V( Vs. SCE)左右产生极谱波，根据测定标记在甲胎蛋白抗体上HRP的量，求得发生免疫反应的a-FP的含量，该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为1.25一400 mg/L.另外北京大学朱志伟和李南强等【’“]研究了9,10-葱酿与血红蛋白的作用，结果表明:9,10-葱酿与血红蛋白作用可形成一种具有电活性的超分子化合物.并制备了化学修饰玻璃碳电极.可用于血红蛋白的检测.蛋白质的测定方法特别是物理化学方法还有不少，如丁永生等[19]利用血清中铁传递蛋白计量化学结合铁的性质，用标准铁饱和铁传递蛋白，通过对铁标准溶液准确定量测定血清铁传递蛋白的浓度.理想的方法是灵敏度高，线性范围广、干扰物质少、操作简单、快速、适应于常规临床检验、测尿或血液中各种蛋白成分的方法，但很难发现.
2免疫法
所谓抗原是指引起机体产生抗体的物质，而抗体是指在抗原的刺激下产生的物质.抗原与抗体结合生成沉淀以达到机体
免疫的目的.抗原和抗体都属于蛋白质，固定一定的抗体，通过免疫反应，就可测定蛋白质.
2.1免疫扩散法
1897年Kraus发现斑疹伤寒病原体的无细胞培养物和相应抗体混合时发生沉淀，第一次提出了免疫沉淀反应的报告
1905年Bechhold发现免疫沉淀反应可以在明胶中进行.1927年Beiuer发现明胶可以被琼脂代替，杭原与抗体的免疫沉淀反应
可以在琼脂中进行，琼脂是一种良好的惰性载体.1946年Oudin报道了在试管中进行免疫扩散技术.1948年Elek和Ouchter-long分别建立了同时比较鉴定两个以上抗体或抗原的技术，使免疫化学分析向前推进了一大步.
2.1.1环状免疫单扩散法:将一定量的抗体与含缓冲溶液的琼脂糖凝胶混匀铺成适当厚度的凝胶板，再把抗原滴进凝胶板的小孔中，在合适的浓度和湿度环境中，经过一定的时间，抗原由小孔向四周扩散，与沉匀在琼脂凝胶中的抗体相互作用，当杭体扩散到一定的距离，并且抗原抗体的比例合适时形成沉淀环，这一沉淀环是一种抗原抗体复合物.抗体的浓度一定，抗体向琼脂凝胶扩散形成的沉淀环不再增大，这时沉淀环的面积与抗原浓度在一定范围内呈线性关系，这样即可定量测定抗原物质一待测样品中蛋白质的含量。有人用此法测定了牛奶中的蛋白质〔2o]
2.1.2双向扩散法:一定浓度的琼脂糖凝胶是多孔的网状结构，大分子物质可自由通过，这种分子扩散作用可使分别在两处的抗原和相应抗体相遇形成抗原抗体复合物，比例合适时出现沉淀，沉淀的性质与位置取决于抗原分子量的大小、分子结构、扩散系数和浓度.如果抗体存在于多种有机大分子中，出现多条沉淀线，即可定性抗原、诊断疾病[f za]此法操作简单，且灵敏度高，是最常用的免疫法.
2.2琼脂糖免疫电泳法
免疫化学与琼脂电泳相结合形成了免疫电泳技术，这是一种灵敏度高的蛋白质分离鉴定技术.可用于定性、定量抗原或抗体.此技术是1953年由Graba及Wililims提出，后来由Scheigge:改进形成的一种微量蛋白质的测定.该法用样少、分辨率
高.可分为以下几种常用免疫电泳法:
2.2.1微量免疫电泳法:在有离子的琼脂糖的玻璃中心各挖一长槽，槽的两侧各挖一个小圆孔，孔内加入待测样品.电泳时，由于样品中各蛋白质的等电点不同，其带电性不同，因而被分离成几个区带.电泳后在长槽中加入相应的抗血清于37℃时扩散，分离的蛋白质就与相应的抗体形成大小不同、深浅各异的沉淀弧一般情况下每一沉淀弧代表蛋白质混合物中一种成分，以此进行定性、定量测定2.2.2对流免疫电泳:将抗原和抗体分别加入琼脂板样品孔内同时进行电泳.抗原由阴极向阳极移动，抗体向阴极倒退，两成分相遇，特效抗原与抗体结合，形成可见的白色沉淀物，即对流免疫电泳.这种方法是抗原与抗体在电场作用下定向移动，限制了抗原与抗体的自由式扩散，可提高灵敏度16倍.
2.2.3火箭电泳法:取一定量单价血清，与一定量琼脂凝胶混匀，然后铺板，板上挖几个小孔，每孔中加不同浓度的相应抗原，将此板放在pH8.6的电泳槽中进行电泳，在电场作用下抗原向正极泳动，在泳动中与凝胶中的抗体反应，逐渐形成类似火箭的沉淀峰.其峰的高度与抗原的浓度成正比，以此可定量抗原.国外有人用此法测定了全血清中的C一活性蛋白质〔23].如果被测抗原等电点与单价血清(抗体)的等电点相同，不仅需要用琼脂糖，而且需对抗原进行化学处理，使负电荷相对增加，这样处理后才能出现火箭峰.处理时，一般用氰酸钾或甲醛.
2.2.4双向定量免疫电泳法:双向定量免疫电泳法又称交叉电泳.先将抗原进行电泳分离蛋白质的各组分;放在抗体琼脂板上，使各组分在垂直方向再电泳一次，根据各组分和沉淀峰便可定性、定量抗原.
2.2.5放射免疫电泳法:RIA法是将放射性同位素测定法和免疫反应相互结合的一种技术.优点是特效、敏感、精确、简单一般不需要复杂的提纯步骤.目前该法已用于细菌和病毒抗原的分析、抗体的测定，各种免疫球蛋白和血清蛋白的定量测定及肿瘤有关的抗原测定等
2.3毛细管电泳免疫法
在用琼脂糖免疫法定量分析抗原和抗体蛋白质时，抗原和抗体的纯化是非常麻烦的间题.近年来发展较快的是毛细管免疫电泳，它的分离速度快、分辨率高且不受染色时间、温度、染色剂浓度、显色时间等因素影响.诸多优点使其广泛地应用于包括球蛋白在内的各种临床指标的检测.其基本原理是在进行毛细管电泳分离后将血清与某种蛋白的抗体混合后，观察峰高的降低，以此进行抗体的定性和定量测定.现在多采用计算机图像处理的方法，从电泳图谱中抽取有用的信息，采用图像分析技术确定电泳图谱中蛋白质的强度〔2s]. Klein及Joilifffz5]认为可用前清蛋白作为血清蛋白的毛细管电泳的检测限，用CE方法检测出血清蛋白等诸多蛋白质fz}]
（待续）
3展望
现在报道的文章大多集中于纯蛋白或蛋白的简单复合物的测定，随着毛细管电泳等分离手段的快速发展，一次快速大量分离、测定一种样品中各种蛋白质的方法必将大量涌现.
较新的方法是：
1.近红外光谱波段优化选择在驴奶成分分析中的应用 郑丽敏
2.复2复合近红外光谱法在牛奶测定中的应用 褚鹏蛟
3.牛奶中蛋白质含量的直接电位测定方法研究 秦立虎
| 用直接电位法测定牛奶中蛋白质含量的试验研究 | 秦立虎 |
| 电流法快速测定鲜奶中蛋白质含量 | 谢平会 |
| 牛奶中蛋白质含量的示波滴定法 | 李刚 |
当务之急是研究出简单快捷的蛋白质直接检测法。从根本上是提高民族的道德水准，因为我们吃的并不全是奶，告诉大家一个真实的秘密：没有加三聚氢以前是加尿的！（因为当时收奶要检测比重，尿与奶比重相近）
儿童没有毒奶粉，不能长成大丈夫，这就叫无毒不丈夫
原文由 [B]海底森林[/B] 发表: 故意在奶粉（尤其是婴儿奶粉）中下毒，简直就是谋杀。
温家宝总理道歉：“很对不住大家！”
中国总理温家宝昨天在北京为毒奶丑闻向市民致歉，这是三鹿集团被揭发生产导致婴儿肾结石的三聚氰胺毒奶粉后，官方首次公开道歉。毒奶粉的受害婴儿昨天暴增至5万多人，官方称，9月份以来没有新增死亡病例。
央视《新闻联播》昨晚报道，温家宝到北京市医院、社区和商场，看望在毒奶粉丑闻中患病的儿童，了解救治情况和奶制品市场。
画面显示眉头深锁的温家宝在探访一个退休工人家后，在小区与市民碰面时说：“很对不住大家！”
温家宝说：“出了这样一起特大食品卫生事件，做父母的痛心，我们也很痛心。虽然老百姓很理解，但是作为政府，我们感到很内疚。”
在医院视察的时候，温家宝说：“发生这样的事情，我心里感到很不安，群众着急，医生着急，我们也着急。”
他也抨击企业“没良心”，强调“要追究领导责任，对这样的企业，也要坚决整顿、处理，一个也不放过！”
对于丑闻的教训，温家宝说：“这次事件对整个食品安全都是一个警示。通过处理这件事情，我们要认真总结和反思，把食品安全工作进一步抓好。”他强调要透明化：“我们要对人民负责，就必须如实地把情况都向老百姓公开。”
中国政府网昨天引述温家宝说，当局已经采取了三项紧急措施：彻底检查全部婴幼儿奶粉、液态奶、成人奶粉、其他各种奶制品，不留死角；发现有问题的奶制品，一律下架、封存、销毁，决不允许流入其他地方；对吃过问题奶粉的患者免费检查和治疗。
三聚氰胺白粉能够微溶于热水，分子含氮量=66%[蛋白质的含氮量<30%]，使用“凯氏定氮法”的结果显示液体“含有蛋白质”。假如不良食品商添加1元钱的三聚氰胺白粉，能达到5元钱的蛋白质含量测试标准。危害呢，三聚氰胺溶液冷却之后，在人体温度37.5度之上就结晶了，而蛋白质分解的尿素要在37.5度以下才会结晶。我们喝下牛奶撒出的尿液是透明的，然后变得浑浊因为尿素结晶了。
乳品商往鲜奶当中添加三聚氰胺白粉，经过干燥高温喷雾制成奶粉，溶于热水喝下胃里就开始冷却结晶了，经过血液循环到人体过滤器--肾脏里面积淀。特别是婴幼儿的肾脏稚嫩就更不妙了。三聚氰胺结晶的化学性能耐水、耐热、耐老化、耐电弧.
家中测试奶粉中是否含三聚氰胺的简易方法：
1、按比平常浓的分量用热水冲奶粉，充分搅拌到不见固块，然后放入冰箱，待牛奶静置降温。
2、准备黑布一块和空杯一个。把黑布蒙在空杯口上作为过滤器。
3、将冷却的牛奶倒在黑布上过滤。
4、如果有白色固体滤出，则用清水冲洗几次，排除其它可溶物。
5、如果冲洗后发现有白色晶体，可以将晶体放入清水中，该晶体如果沉入水底。那就很可能是三聚氰胺，这种奶粉不能用了。
有可能极少量三聚氰胺测不出。22家企业的产品三聚氰胺含量的数量级不一样。三鹿2563mg/ml高举榜首。圣元从150到15.1不等，有宝宝妈妈通过上述方法试验，即使象圣元牌这样含量较少三聚氰胺的奶粉也能检测出来，说明这个办法非常有效。
转帖：
三元在这次牛奶质量大检测中，百分之一百的合格。知情人士透露，本来一些品牌赞助北京奥运，和奥运会签署了供应协议，后来质量不过关，最后还是用三元顶了上去。虽然三元和三鹿，只有一字之差，那质量，可就差了老鼻子了！
北京人喜爱三元，不仅因为三元是地方产品，重要的是三元奶制品等，是中南海、人民大会堂宴会厅的座上宾。虽说市面上的奶制品，不是特供的优良品种的母牛生产的，但是受特供的影响，生产作业的流水线和加工程序是基本一样的，所以质量相对可靠。
“三元”生产线全部由国外引进，有一系列国际一流的乳品检测化验仪器，所有原料奶，均经过30项指标的检测，要求必须是100％合格，达到国际先进的欧盟标准。加工过程更是极尽精细、复杂：“让喝三元奶的人，像喝刚从牛奶身上挤出来的奶一样。
在位于京郊永乐店地区的三元绿荷第一牧场，这里具备先进的奶牛饲养工艺。三元食品公司建有液态奶、发酵奶和奶粉三大生产基地，整套生产线全部由国外引进，生产流程基本实现了自动化。为出产优质鲜奶，他们斥巨资配备了液相色谱仪、冰点仪、进口乳脂快速检测仪和抗菌素检测仪等一系列国际一流的乳品检测化验仪器，所有原料奶，均经过30项指标的检测，要求必须是100％合格，达到国际先进的欧盟标准
三元80%的奶产品，出自于这样的自建养殖场，其他签约奶厂，也比照执行。他们为奶牛配备有兽医勤查身体；每头奶牛都有电子编码，追踪当天的产奶质量；电脑控制奶牛的挤奶和消毒，把牛奶从奶牛的身体输入到低温罐内；迅速冷却、密封、冷藏运送到工厂；在全封闭条件下进行加工，并通过专业配送公司迅速投放到市场。三元的人们是这样认为的：牛奶的质量，没有比在奶牛的身体里更好更安全，我们要做的，是让喝三元奶的人，像喝刚从牛奶身上挤出来的奶一样。这样的奶制品，怎么能不可靠呢？
奥运期间，提供给奥运会的奶制品是安全的，提供给奥运会的所有蔬菜和食品都是安全的。那么问题来了，既然我们能为奥运会、能为中南海提供安全可靠、高质量的奶制品和食品，我们为什么不能向全社会提供呢？看到过报道，为奥运会提供蔬菜、肉类、食品等基地，也都和三元一样，甚至每一头猪都要每天健身两个小时，甚至每一个西红柿、每一个土豆都有电子编码，以保证质量、安全和责任。看来，不是不会质量的监管，不是不会实行制度的管理，不是不能保证食品的安全。
至少有一点可以试试-----喝三元奶，这也可以问问北京的朋友们。
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